中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准
食品卫生微生物学检验
沙门氏菌、志贺氏菌和致泻大肠埃希氏菌的
肠杆菌科噬菌体检验方法 GB 4789.31-94
Microbiological examination of food hygiene
Examination of Salmonellae,Shigellae,and diarrhoea
causative Escherichia coli by means of the diagnostic
typing phage set for enterobacteriaceae
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1 主题内容与适用范围
本标准规定了应用肠杆菌科噬菌体诊断法检验食品中沙门氏菌、志贺氏菌和致
泻大肠埃 希氏菌的基本要求、操作程序和结果判定。
本标准适用于各种食品、食物中毒的检验,也适用于食品从业人员的肠道沙门氏
菌和志贺氏菌带菌检验。
2 引用标准
GB 4789.4 食品卫生微生物学检验 沙门氏菌检验
GB 4789.5 食品卫生微生物学检验 志贺氏菌检验
GB 4789.6 食品卫生微生物学检验 致泻大肠埃希氏菌检验
GB 4789.28 食品卫生微生物学检验 染色法、培养基和试剂
3 设备和材料
3.1 温箱:36±1℃
3.2 水平仪。
3.3 灭菌平皿:90mm×15mm。
3.4 定量滴管:每滴约10μL。用输液用的玻璃接管配4 1/2 号针头灭菌。
3.5 橡皮乳头。
3.6 灭菌棉签。
3.7 酒精灯。
3.8 接种棒,镍铬丝。
3.9 试管架。
4 培养基和试剂
4.1 营养琼脂、营养肉汤按GB 4789.28中3.7和3.8进行。
4.2 蛋白胨水、靛基质试剂按GB 4789.28中2.13进行。
4.3 三糖铁琼脂按GB 4789.28中3.24和3.25进行。
4.4 肠杆菌科诊断用噬菌体,7种和3种。安瓿启开后用无菌毛细吸管吸出移入灭菌
小试管内,用无菌胶塞塞紧,放于4℃冰箱备用。
5 检验程序
5.1 肠杆菌科诊断用噬菌体检验沙门氏菌的程序见图1:
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│ 检 样│
└──┬───┘
┌──────┴────────┐
│ 前增菌,增菌和分离按GB4789.4 │
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┌───┴─────┐
│ 挑取可疑菌落 │
└┬───────┬┘
┌─────┴┐
┌┴──────────┐
│噬菌体试验 │
│TSI(斜面,底层产气,H2S │
└──┬───┘
│蛋白胨水(靛基质 │
│
│尿素(PH7.2),KCN,赖氨酸│
┌────┼──────┐
└┬────┬─────┘
┌─────┴┐┌──┴───┐┌─┴───┴┐ │
│0-1裂解 ││非如左述的各││各种噬菌体 │ │
│其他均不裂解││种裂解结果 ││均不裂解 │ │
└─┬────┘└──┬───┘└──────┘┌──┼───────┬───────┐
│
│
┌─────┴┐┌┴─────┐┌┴─────┐┌┴─────┐
│
│
│H2S+,靛基质-││H2S,靛基质+,││H2S+,靛基质-││非如左述的 │
│
│
│尿素-,KCN- ││尿素-,KCN- ││尿素-,KCN- ││各种反应 │
│
│
│ 赖氨酸+
││ 赖氨酸+
││赖氨酸 ││
│
│
│
└─┬────┘└──┬───┘└──┬───┘└─┬────┘
│
│ │
┌──┴────┐ ┌┴──┐ │
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│
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│甘露醇,山梨醇 │ │0NPG│ │
│
│
│
└──┬────┘ └┬──┘ │
┌─┴────┐┌──┴───┐┌───┴──┐ ┌──┴──┐┌───┴─┐ ┌──┴──┐
│ 沙门氏菌 ││非沙门氏菌 ││沙门氏菌 │ │沙门氏菌 ││非沙门氏菌│ │非沙门氏菌│
│血清学试验 ││
││血清学试验 │ │血清学试验││
│ └┬────┘
└──┬───┘└──┬───┘└──┬───┘ └──┬──┘└─┬───┘ │
└───────┴───────┼─────────┴─────┴──────┘
┌──┴───┐
│ 报 告 │
└──────┘
图1 肠杆菌科诊断用噬菌体检验沙门氏菌的程序
5.2 肠杆菌科诊断用噬菌体检验志贺氏菌的程序见图2:
┌──────┐
│ 检 样 │
└──┬───┘
┌──────┴───────┐
│ 增菌和分离按GB4789.4 │
└──────┬───────┘
┌───┴─────┐
│ 挑取可疑菌落 │
└───┬─────┘
┌───┴─────┐
│ 挑取葡萄糖半固体 │
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│TSI底层产酸,斜面产│ │非如左述的各种反应结果│
│碱,H2s-不产气,无 │ └──────┬────┘
│动力
│
│
└────┬────┘
│
┌──┴───┐
│
│噬菌体试验 │
│
└──┬──┬┘
│
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│
│SH裂解,并呈 ││Sh不裂解 │
│
│现各种裂解模式││
├┐
│
└─┬─────┘└──────┘│ │
┌───────┴┐┌────────┐ │ │
│血清学试验与裂解││血清学试验与裂解│ │ │
│模式相符且被1 ││模式不相符或不被│ │ │
│RTD SH裂解 ││1 RTD SH 裂解 │ │ │
└────┬───┘└────┬───┘ │ │
┌──────┐┌───────────┐ │ │
│生化分群试验││葡萄糖铵试验必要时加做│ │ │
└──┬───┘│乙酸纳,克氏柠檬酸盐,粘 │ │ │
│ │液酸,七叶苷.水扬苷试验 │ │ │
│ └─────┬─────┘ │ │
│
│
│
└───┐
┌──┴───┐
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│志贺氏菌属分│
│葡萄糖铵+或任 │ │非志贺氏菌│ │非志贺氏菌│
│群及分型结果│
│何其他阳性结果│ │
│ │ │
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└──┬────┘ └──┬──┘ └─┬───┘
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│血清学试验 │ │
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