检测的准备工作以及操作中的注意事项

1 开展微生物检测所需的基本条件

1.1 一间通风良好、面积不需要很大的独立房间，房间里最好备有紫外线消毒灯，洗手盆，实验台。（房间里不要堆放杂物）；

1.2 一台高压锅或红外线消毒柜（家用消毒碗柜也可，用于消毒取样罐、均质杯、吸管、培养皿和其他取样工具，在消毒柜内放一小杯水可使消毒效果更有保证，注意消毒物品不要接触到红外发热管）；

1.3 一台小型恒温培养箱；有条件时，配备一台普通冰箱；

1.4 一个食品微生物快速检测箱，箱内备有实验用的一些工具和器皿；

1.5 检测用测试片。

2 样品稀释液的配制与移液器管头的消毒

2.1 生理盐水的配置与灭菌：取9g氯化钠（NaCl）到三角烧瓶中，加入1000ml蒸馏水或纯净水，煮沸10min,盖上消毒棉后放至室温。

2.2 移液器管头的消毒：将管头放入锡箔袋或用锡箔纸包好，放入民用红外线消毒柜中消毒；或将管头放入消毒液中浸泡，取用时注意甩干消毒液并用无菌生理盐水冲洗三次。

2.3 消毒效果观察：用移液器取1ml配制好的生理盐水加入到菌落总数检测纸片上，放入培养箱，恒温36℃±1℃培养15～24h，观察测试片上不应有细菌生长。此操作可与样品检测同时进行。

3. 无菌操作和注意事项

3.1点燃酒精灯，营造局部无菌环境。取样和加样时尽量靠近酒精灯操作。操作工具如镊子、剪子、长柄勺、小刀等，在酒精灯上用火焰消毒后使用。

3.2 用75%酒精棉球将手和样品开口处周围抹擦消毒。

3.3 将无菌袋或无菌器皿放在天平上，称量25g样品（液体样品采用移液枪或移液管量取），加入225mL生理盐水将样品溶解，混匀（此为10倍样品稀释液），从中取1mL加入到无菌试管中，加入9mL生理盐水，混匀（此为100倍样品稀释液），一般情况下，取10倍和100倍样品稀释液各1mL分别加入到纸片上进行检测，具体操作详见专一纸片操作说明。

3.4若不能及时检验,应将冷冻样品置于-15℃保存，非冷冻而易腐的食品，应置于4℃冰箱保存。检验前冷冻样品可于2～5℃ 18h内解冻，或在45℃以下15min内解冻。

3.5所有微生物快速检测产品均需存放在4～10℃冰箱中，保质期为一年，铝箔袋打开后，未用完的纸片要放回铝箔袋中封好，放到冰箱中，一个月内用完。在高湿度的环境中可能出现冷凝水，最好在拆封前将整包回温至室温。

3.6 接种时，为防止菌落聚集在一起不方便计数，最好缓慢均匀地将样品匀液加到加样区的各个部分。加完液稍等片刻，待液体渗透差不多时再将上盖膜轻轻盖下，以免液体外溢造成结果误差。

3.7 培养时，一定要将测试片放回原来的自封袋中，将袋口密封好再放入培养箱中，否则水分蒸发使滤纸变得很干燥，影响菌落的生长。

3.8 致病菌出现阳性样本时，在有条件的情况下用其他方法进行验证（揭开上盖膜，用接种针挑取测试片上的菌落进一步的分离和鉴定），没有条件时再取样品重复检验一次。

3.9 注意使用过的测试片上带有活菌，需及时按照生物安全废弃物处理原则进行处理 。

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